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Você também precisa copiar o arquivo .hof do mapa para a pasta do ônibus, e quando for adicionar o ônibus no mapa certifique-se de selecionar o Depot do mapa.
Tipo, quando você baixar o mapa, deve vir junto um arquivo .hof (por exemplo, no caso do mapa Estrela Dalva o arquivo se chama “ESTRELA DALVA.hof”). Você precisa copiar esse arquivo e colar na pasta de cada ônibus que você for usar no mapa. Aí, quando você iniciar o jogo no mapa e clicar para adicionar o ônibus, no último campo da janela (o campo “Depot”), selecione o do mapa que você estiver usando.
Verifique também se a linha que você quer fazer não é linha noturna ou de finais de semana, como o DM7 disse.
Qual mapa? Horário?
Dependendo do mapa e do horário que escolheu pode ser que a rota não opere no dia/horário, existem mapas que tem linhas apenas noturnas ou que não rodam no feriado. Espero ter ajudado.